PVDF轉(zhuǎn)印膜的孔徑怎么選?
一旦轉(zhuǎn)印膜被浸濕,蛋白結(jié)合可通過蛋白與膜的接觸而實(shí)現(xiàn)。由于蛋白與膜的結(jié)合貫穿整個(gè)膜的厚度(深度),結(jié)合能力是由孔的內(nèi)部表面積來決定的。0.2um PVDF轉(zhuǎn)印膜內(nèi)部表面積大約是0.45um PVDF轉(zhuǎn)印膜的三倍,使其吸附能力更高。
從下圖實(shí)驗(yàn)中,可以看出,20KD以下蛋白選用0.2um PVDF轉(zhuǎn)印膜, 20KD以上蛋白選用0.45um 轉(zhuǎn)印PVDF膜。
圖: 延長電轉(zhuǎn)時(shí)間時(shí)0.45um PVDF轉(zhuǎn)印膜和0.2um PVDF轉(zhuǎn)印膜結(jié)合蛋白的效果。分子量標(biāo)準(zhǔn)品(第1、3、5、7泳道)和小牛肝裂解液(第2、4、6、8泳道)通過槽轉(zhuǎn)印法轉(zhuǎn)移到0.45um PVDF轉(zhuǎn)印膜和0.2um PVDF轉(zhuǎn)印膜,并用考馬斯亮藍(lán)染色。在第一張轉(zhuǎn)印膜后再放一張0.2um PVDF轉(zhuǎn)印膜以捕獲穿過的蛋白。(第5和6泳道在0.45umPVDF后面;第7和8泳在0.2um PVDF后面。即第三張膜是放在第一和第二張膜的后面)